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  • 小鼠IgG的應用場景和原理

    • 發布時間:2023-10-08

    1. 小鼠IgG產品的用途

    (1)免疫反應中的封閉劑,封閉固相材料表面,降低抗體和抗原的非特異性結合。

    (2)免疫反應中的阻斷劑,阻斷待檢測樣品中內源性異嗜性抗體對抗原抗體的非特異性結合,提高反應的靈敏度和特異性。

    (3)在一些生化分析測試中作為IgG對照品。

    (4)作為蛋白質的穩定劑。

    (5)作為參考抗原,用于藥物試驗中觀察免疫效果。

    2. 小鼠IgG的應用場景和原理

    作為免疫反應中的封閉劑和阻斷劑,小鼠IgG適用于幾乎所有的免疫檢測分析,包括酶聯免疫吸附、側向流免疫層析、化學發光免疫分析、蛋白免疫印跡、膠體金免疫層析等,是IVD領域的通用原料,被廣泛應用于疾病診斷試劑盒、檢測試紙、醫學檢測、實驗室分析等場景。

    小鼠IgG具體應用場景主要包括以下幾個方面:

    (1)免疫診斷試劑

    鼠源的IgG被用作免疫分析試劑。通過使用特異性的抗體與鼠源IgG結合,可以檢測目標蛋白質在樣本中的存在并確定其數量。

    應用場景:ELISA、Western Blotting、免疫組化等抗原檢測

    原理:作為標記過的抗體,與檢測抗體(直接檢測)或一組匹配的未標記檢測抗體和標記二抗(間接檢測)檢測病人樣本中的的抗體。

    n1.jpg

    (2)阻斷劑、封閉劑

    在某些免疫反應實驗中,背景信號會干擾所需的結果準確性,研究人員使用小鼠IgG來消除這種背景信號,小鼠IgG會結合一些非特異性的受體和其他成分,從而降低背景信號,阻斷非特異性成分對檢測的干擾;此外,小鼠IgG可用于飽和固相材料表面上未被抗體包被的結合位點,從而防止被檢測物質的非特異性結合,起到封閉固相表面的作用。

    應用場景:ELISA、膠體金、免疫熒光、疾病診斷試劑盒;

    原理:在免疫診斷檢測中,經常存在非特異性干擾影響檢測結果的準確性。這種非特異性結合可發生于

    a. 固相材料和非目標蛋白質的結合或

    b. 待測樣品中存在的內源性檢測抗體和檢測試劑中抗體的結合。

    為防止非特異性結合,在固相材料包被之后使用封閉劑封閉固相材料上剩余未結合的位點,在準備檢測樣本的過程中使用阻斷劑阻斷內源性干擾抗體與檢測試劑抗體的結合,從而提高檢測的靈敏度和特異性,避免假陽性或假陰性結果。

    樣品中的未結合的雜質﹐如蛋白質﹐干擾分子等和測定標記物結合到固相材料表面并與特異性抗原-抗體反應信號競爭從而引起的背景噪聲和降低檢測信號。

    圖片2.jpg

    封閉緩沖液可包被固相材料上的開放位點從而防止未結合的雜質與開放位點的非特異性結合。小鼠IgG作為一種理想的封閉劑,一方面能夠有效地封閉固相材料表面疏水性和親水性位點。另一方面可以作為—種穩定劑用以防止蛋白在與固相材料的表面反應時發生變性。

    理想封閉劑具有以下特征:

    a. 有效地阻斷測定反應物非特異性結合到固體材料表面;

    b. 不影響已包被到固體材料表面的試劑有效成分,可以起到試劑有效成分在固相表面穩定劑(防止變性)的作用;

    c. 不與其它試劑有效成分發生交叉反應;

    d. 不具有酶活性并由此可能與試劑中的底物反應而使信號加強或降解試劑中的反應物;

    e. 每個批號批間差小。

    在免疫檢測中,患者樣本中通常存在多種內源性干擾物質,主要是異嗜性抗體(HA)、人抗鼠抗體(HAMA)和類風濕因子(RF),它們通過與檢測抗體非特異性結合或發生弱交叉反應而降低檢測的靈敏度和特異性, 導致假陽性或假陰性結果。

    圖片3.jpg

    雙抗夾心抗原檢測、競爭法和lgM捕獲檢測都易受內源性干擾的影響,因此,想要提高免疫診斷檢測的準確性和特異性,使用專門的免疫阻斷劑來降低這些非特異性干擾引起的錯誤結果是必不可少的。

    (3)流式細胞分選:

    鼠源IgG通常用于流式細胞儀中用于區分不同的細胞類型和表面標志物。其可以:

    a 標記靶細胞:在流式細胞術實驗中,研究人員通常會選擇一種或多種與鼠源IgG結合并高度特異性的熒光素或染料,例如FITC、PE、APC等,將其與鼠源IgG結合用于標記靶細胞。

    b. 區分靶細胞(免疫診斷):標記好的鼠源IgG熒光素或染料結合到靶細胞表面標志物上后,流式細胞儀在掃描細胞時,可以根據相應熒光素或染料的激發和發射波長區分不同的靶細胞和它們的表面標志物。

    c. 降低非特異性結合(阻斷劑):鼠源IgG會通過其Fc受體與流式細胞試劑盒中的其他成分和細胞膜上的Fcγ受體結合,從而降低非特異性結合,使正式實驗結果更加可靠。

    (4)對照鼠源IgG:

    用作免疫沉淀、免疫共沉淀、染色質免疫沉淀、免疫組化、免疫熒光、免疫印跡、等抗體相關實驗時小鼠來源特定抗體的對照IgG。

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